慶祝我司合作客戶成功發(fā)布關于腦缺血損傷的文獻

標題：《GPR91在小鼠深低溫低流量腦缺血再灌注損傷中的作用及機制研究》

摘要：背景:深低溫低流量技術(Deep Hypothermic Low Flow,DHLF)是目前主流的體外循環(huán)技術,在心臟手術的過程中,其不僅能保證大腦的基礎代謝和氧氣消耗,還能提高神經細胞對缺氧的耐受能力,減輕心臟手術過程中的神經損傷。然而經過長時程的DHLF后,中央神經系統仍會出現較嚴重的缺血再灌注損傷,意識障礙、認知障礙和神經心理學障礙等神經系統的損傷均已見報導。GPR91是線粒體相關的G蛋白偶聯受體,其在DHLF病理過程中的具體機理目前還不清楚。因此,本次研究擬探討GPR91在DHLF后腦缺血再灌注損傷中的具體作用和分子機制,為尋找分子干預的有效靶點提供理論基礎。 方法:本次研究將通過生物信息學分析,探究m RNAs表達譜情況;通過q RTPCR技術檢測患兒DHLF前后血液中GPR91表達水平;建立DHLF模型,通過q RT-PCR和Western Blot技術驗證GPR91在DHLF模型大腦皮層m RNA和蛋白的表達;應用HE染色、尼氏染色、曠場實驗、斯金納箱實驗和改良行為學評分檢測小鼠神經損傷程度;通過Western Blot技術驗證GPR91、PKCδ、磷酸化PKCδ、Bax、Bcl-2、P53等蛋白的表達情況;建立深低溫糖氧剝離再灌注模型,應用si RNA和質粒轉染技術,結合流式細胞學、免疫熒光染色及免疫印跡等實驗,通過體內和體外實驗驗證GPR91對PKCδ/P53的調控和對凋亡的影響。 結果:生物信息學的結果顯示,G蛋白偶聯受體、PKC和P53參與腦缺血再灌注損傷后的生物性過程和信號轉導,GPR91是腦缺血再灌注損傷的關鍵基因,q RT-PCR結果表明,在患兒DHLF后的血液樣本中,GPR91m RNA的表達明顯升高。q RT-PCR和Western Blot驗證結果表明,在DHLF小鼠模型的腦組織中,GPR91 m RNA和蛋白的表達有明顯的升高。敲除GPR91可使DHLF模型后的小鼠壞死的神經細胞減少,同時也可使小鼠的空間學習和記憶能力得到提高。體外實驗證實,在GPR91敲除深低溫糖氧剝離再灌注(h OGD-R)造模后,ROS下降,JC-1升高,Bax、磷酸化和總PKCδ,P53的表達明顯減少Bcl-2的表達明顯上升,而磷酸化后的PKCδ,其表達下降的幅度比PKCδ的表達下降的幅度要大,ROS升高,JC-1下降。在抑制PKCδ,h OGD-R造模后,Bax、P53的表達明顯減少,ROS下降,JC-1上升,Bcl-2的表達明顯上升,回復實驗表明,GPR91可以通過磷酸化PKCδ,使P53表達水平提高,ROS升高,JC-1下降,進而使細胞凋亡減少。 結論:本研究揭示了GPR91在小鼠DHLF腦缺血再灌注損傷中的調節(jié)機制,GPR91通過調控PKCδ/P53信號通路影響線粒體功能從而使神經細胞凋亡損傷腦組織。