線粒體提取試劑盒使用詳情

線粒體提取試劑盒使用說明（僅供參考）

產(chǎn)品簡介：
線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

操作步驟：
1. 樣本處理 。
2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管。
3. 取上清。
4. 取上清。
5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀。
6. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀。

注意事項：
1. 為保證獲得完整的線粒體，務(wù)必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞，這是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。
2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度。3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 轉(zhuǎn)速與離心力換算：     G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２ G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示； [rpm]２即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。